產(chǎn)品介紹

BD Phosflow裂解/固定緩沖液（5X）558049，BD Phosflow™ Lyse/Fix Buffer 5X

用途
本產(chǎn)品用于全血裂解與固定，適用于細(xì)胞內(nèi)流式細(xì)胞術(shù)分析。例如，在使用激酶激活劑（如佛波酯）刺激細(xì)胞后，BD Phosflow™ 裂解/固定緩沖液可一步完成紅細(xì)胞裂解與白細(xì)胞固定，使研究者能夠快速滅活激酶、磷酸酶和/或蛋白酶，從而檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的真實(shí)磷酸化狀態(tài)。

特性

• 經(jīng)測(cè)試可保留細(xì)胞的光散射特性

• 適用于人源及小鼠全血樣本

• 在淋巴細(xì)胞亞群分析中，全血裂解效果與密度梯度離心法分離PBMCs相當(dāng)

兼容性說(shuō)明
多數(shù)情況下，磷酸化特異性抗體可與細(xì)胞表面標(biāo)志物（如CD標(biāo)志物）同步染色。但請(qǐng)注意，并非所有表面標(biāo)志物均與本產(chǎn)品兼容。

BD Phosflow裂解/固定緩沖液（5X）558049，BD Phosflow™ Lyse/Fix Buffer 5X

推薦的實(shí)驗(yàn)流程

流式細(xì)胞術(shù)操作步驟

樣本處理

1. 使用EDTA或肝素抗凝管采集正常人外周血，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求加入相應(yīng)激活劑處理。

工作液配制
2. 將BD Phosflow™裂解/固定緩沖液(5X濃縮液)按1:5比例用去離子水/蒸餾水(室溫)稀釋為1X工作液，37°C預(yù)熱。工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，實(shí)驗(yàn)剩余溶液應(yīng)棄置。

裂解固定
3. 按1:20比例(血樣:工作液)混合抗凝血與預(yù)熱的1X工作液，強(qiáng)力顛倒混勻8-10次，37°C水浴孵育10分鐘。

細(xì)胞洗滌
4. 500×g離心8分鐘，棄上清，用Hank's solution洗滌細(xì)胞一次。

透膜處理
5. 渦旋重懸細(xì)胞，邊震蕩邊緩慢加入透膜試劑(如預(yù)冷的BD Phosflow™ Perm Buffer II)，冰上孵育30分鐘后離心。

抗體標(biāo)記
6. 洗滌細(xì)胞兩次，用BD Pharmingen™ Staining Buffer染色緩沖液重懸。
7. 加入相應(yīng)抗體室溫避光染色30-60分鐘，洗滌后準(zhǔn)備上機(jī)檢測(cè)。